Osnovni nasveti za krio konzervacijo celičnih kultur

Osnovni nasveti za krio konzervacijo celičnih kultur

Celice nadaljujejo s presnovo med normalno rastno aktivnostjo, kar zahteva sodelovanje različnih proteaz. Ko temperatura pade pod -70 ° C, proteaze prenehajo delovati. Zato lahko celice v okolju z izjemno nizkimi temperaturami ustavijo svoje presnovne aktivnosti in vstopijo v mirovanje, ki omogoča dolgoročno skladiščenje.

1. Eksperimentalni materiali

Osnovni material:

Osnovni kulturni medij

Serum (običajni FBS/NBS)

Ultrapure Workbench

Sterilni dimetil sulfoksid (DMSO)

Sterilna raztopina PBS fosfatne puferne soli

Pipetting pištola

Električna pištola

Priprava poskusov

a) Priprava raztopine za zamrzovanje:

Splošne celice: 55% bazalnega medija + 40% govejega seruma (FBS/NBS) + 5% DMSO

Vitalne celice: 90% govejega seruma (FBS/NBS) + 10% DMSO

Alikvoto Pripravljena raztopina krio konzervacije v 15 ml centrifuge cev [gnezdo] in shranite pri 4 ° C za kasnejšo uporabo.

(b) Priprava celic, ki jih je treba zamrzniti:

Pred zamrznitvijo celic izberite celice z dobrim stanjem rasti in v fazi logaritmične rasti in jih nadomestite s svežim medijem 12-24 ur pred zamrznitvijo, da ohranite stanje celic.

2. Eksperimentalni postopek

1. Upoštevajte gostoto celic, ki jih je treba zamrzniti, kar je približno 80%~ 90%. Uporabite pipeto pištolo za aspiracijo starega medija, dodajte sterilne PBS, da 1-2 krat umivate celice in odstranite preostali medij v kulturnem okolju.

2. Dodajte ustrezno količino tripsina ali prebavnega soka, da lahko tripsin vstopi v celice, in jih postavite v inkubator za prebavo. Upoštevajte stanje celic pod mikroskopom: citoplazma se umakne in celice niso več povezane v liste. Na tej točki dodajte rešitev za zaustavitev, da zaustavite postopek prebave.

3. Celice nežno mehurčite s konico, da tvorijo celično suspenzijo in 3-5 minut centrifugirate celično suspenzijo pri 1000 vrt./min.

Supernatant zavrzite, dodajte ustrezno količino zamrzovalne raztopine in nežno pipeto, da celice štejejo enakomerno. Prilagodite gostoto celice s krio konzervacijskim medijem, da naredite končno gostoto 5 × 106/ml ~ 1 × 107/ml.

4. Za ločevanje kriogenih cevi uporabite pipeto pištolo glede na pričakovano zmogljivost in za pokrov in tesnjenje uporabite avtomatski stroj za zapiranje.

5. Standardni program krio konzerviranja je hitrost hlajenja od -1 ° C do -2 ° C/min, celice, ki jih je treba zamrzniti, pa lahko postopoma zamrznemo v skladu z naslednjimi koraki: sobna temperatura → 4 ° C (20min) → - - -sobna temperatura (20min) → - - - 20 ° C (30min) → -80 ° C ° C (čez noč) → Dolgotrajno skladiščenje v tekočem dušiku.

Prav tako ga lahko shranite neposredno v zamrzovalniku pri -80 ° C čez noč in nato prenesete v tekoči dušik za shranjevanje.

Yongyue Medical je visokotehnološko podjetje, specializirano za raziskave in razvoj, proizvodnjo in prodajo biomedicinskih potrošnih materialov. Nasveti za pipete, pipete, PCR plošča, izdelki za celično kulturo in drugi biološki laboratorijski potrošni materiali. Yongyue Medical je vreden vašega zaupanja in izbire! Dobrodošli, da se posvetujemo!