Podrobna razlaga hlapljivega reagenta v poskusih PCR

Podrobna razlaga hlapljivega reagenta v poskusih PCR.

V eksperimentu PCR po dodajanju reakcijskega sistema previdno pokrijemo pokrov in večkrat potrdimo, da je pokrov zaprt, da se izognemo hlapljivem reagentu. Toda včasih imamo tudi dvome: potrdili smo, da je pokrov tesno zaprt, toda po zaključku poskusa bo reagent še vedno izhlapeval. kakšen je razlog?

Dejansko je hlapnost reagenta ena najpogostejših težav v poskusih PCR in obstaja veliko dejavnikov, ki vplivajo na hlapnost reagenta.

Izhlapevanje se nanaša na to med poskusom PCR reakcijska raztopina izhlapi pri visoki temperaturi, nato pa kondenzira na steni steklenic ali zgornji pokrov, da tvori vodno meglo ali vodne kapljice ali pa neposredno preliva zračno vrzel pokrovčka ali filma Pri spremembi koncentracije reakcijske raztopine. Spremembe, količina reakcijske raztopine se je zmanjšala, nekateri pa so celo izhlapeli v suhost, kar je povzročilo neveljavne poskuse.

1. Vroči tlak, temperatura

V poskusih s PCR običajno segrejemo pokrov, da preprečimo kondenzacijo reagentnih hlapov. Temperatura segretega pokrova je običajno višja od temperature reakcijske raztopine, da se prepreči kondenzacija hlapov.

Termične ogrevalne pokrove lahko grobo razdelimo na naslednje štiri vrste: neoblikovalne ogrevalne pokrove, nastavljive ogrevalne pokrove, prilagodljive ogrevalne pokrove in samodejne ogrevalne pokrove. Nastavljiv ogrevan pokrov ima stiskanje s prstom. Če se ne tesno zategnejo, bodo reagenti izhlapeli. Izhlapevanje roba je mogoče zmanjšati s povečanjem pritiska na ogrevani pokrov. Včasih lahko prehitevanje stisne cev in zasuka gumb. V normalnih okoliščinah lahko električni pametni ogrevalni pokrov samodejno zazna potrošni material različnih višin, samodejno stisne potrošni material, tlak pa je enakomeren in konstanten, s čimer zmanjša izhlapevanje reagenta in ročne napake ter izboljša eksperimentalno natančnost in ponovljivost.

2. Deformacija potrošnega materiala

Za puščanje pare večina ljudi meni, da vročega tlaka pokrova ni dovolj. Pritisk vročega pokrova je zelo pomemben, vendar je to le en vidik. Pravzaprav so zelo pomembni tudi potrošni material.

PCR odprtine so običajno narejene iz plastičnih materialov, ki se po segrevanju močno razširijo in deformirajo. Hitrost toplotne ekspanzije kovinske podlage PCR, ki se uporablja za postavitev plošče PCR odprtine, je izjemno nizka, plošča PCR odprtine pa se po toplotni ekspanziji ne more normalno razširiti vzdolž ravnine. Zaradi izbočenega stanja zgornje toplotne prevleke ne morejo v celoti stopiti v stik s površino PCR odprtine, kar ima za posledico neenakomerno temperaturo in tlak, kar povzroči izhlapevanje reagenta na robu plošče PCR odprtine in vpliva na učinek zaznavanja PCR.

3. Potrošni materiali niso tesno zaprti

Tesnost toplotnega pokrova in potrošnega materiala ne pomeni, da je pokrovček PCR cevi tesno zaprta, kakovost plošče PCR pa je neenakomerna. Kakovostni potrošni materiali, površina šobe in pokrov so gladki, tesnilo za pokrovom škatle pa je dobro in ni enostavno puščati. Inferior potrošni materiali imajo neenakomerne izlive in radialne črte, kar zlahka povzroči uhajanje ali celo izsušiti.

Zato v poskusih PCR poskusite izbrati visokokakovosten in ustrezen potrošni material. Hkrati lahko reakcijski sistem razširimo, da zmanjšamo vpliv izhlapevanja sistema na reakcijo.